ПЦР В ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

 

« вернуться к странице сферы

ПЦР - полимеразная цепная реакция - метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций "золотым стандартом", проверенный временем и тщательно апробированный клинически.

Достоинства метода ПЦР:

  1. Среди методов диагностики инфекционных возбудителей, ПЦР обладает наиболее высокими показателями чувствительности (за счет экспоненциального накопления фрагментов ДНК) и специфичности (за счет выявления уникальных для микро-(макро)-организмов участков генетического материала).

  2. Возможность использования разнообразного клинического материала.
  3. Возможность одновременного выявления нескольких микроорганизмов в одной биологической пробе, в отличие от бактериологических методов, где для разных возбудителей используются разные способы культивирования.
  4. Простые требования к условиям хранения и транспортировки материала от пациента в лабораторию. Повышена стабильность при транспортировке до лаборатории, поскольку нет необходимости сохранять возбудителя в живом виде, в отличие от бактериологических и вирусологических методов.
  5. Скорость проведения анализа: время получения результатов, для некоторых инфекций меньше, чем 24 часа.
  6. Для некоторых микроорганизмов (например, Mycoplasma genitalium) ПЦР – единственный метод диагностики.

Но, несмотря на все достоинства ПЦР, преимущественное его использование для выявления инфекционного возбудителя применимо не ко всем микроорганизмам.

Так, например, для таких возбудителей как стафилококк или стрептококк лучше использовать микробиологический метод, а для диагностики бруцеллеза, бореллиоза, токсоплазмоза, краснухи, кори – целесообразнее использовать иммунологические методы (например, ИФА).

Метод ПЦР позволяет:

  1. Определить этиологию инфекции (т.е. какой именно микроорганизм или их сочетание вызвали воспалительный процесс). Для некоторых возбудителей ПЦР – это единственный метод диагностики на сегодняшний день.
  2. Определить количество возбудителя.
  3. Осуществить контроль за течением инфекционного процесса и оценить эффективность лечения.
  4. Благодаря своей высокой чувствительности, ПЦР позволяет выявлять возбудителя даже при минимальном его содержании.

 

ПЦР в диагностике гепатитов

В настоящее время известно как минимум 5 вирусов, способность которых вызывать поражение печени доказана. Это вирусы гепатита А, В, С, D, Е. В редких случаях гепатит может быть вызван вирусом Эпштейна-Барр, вирусом простого герпеса. Все вышеперечисленные вирусы относятся к различным семействам, имеют разные биологические свойства и соответственно, тактика лечения будет тоже значительно отличаться в зависимости от этиологии гепатита.

Учитывая вышеизложенное, весьма актуальной проблемой является адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов, которая невозможна без использования современных молекулярно-биологических методов, одним из которых является ПЦР.

Итак, в чем же состоит достоинство ПЦР в диагностике гепатитов? Попробуем разобраться:

  1. Вирусный гепатит А (ВГА): ПЦР используется для обследования контактных лиц и более раннего выявления заболевших гепатитом А в очагах инфекции (например, в детском коллективе), т.к. РНК вируса гепатита А появляется в крови больного гепатитом А гораздо раньше, чем антитела (anti-HAV IgM). И еще один важный момент! Считается, что через неделю после появления клинических симптомов, больной гепатитом А перестает быть заразным… Но это касается только фекально-орального пути передачи вируса. В крови больного гепатитом А вирус присутствует гораздо дольше (иногда до нескольких месяцев), т.е. возможность заражения гепатитом А через кровь не ограничивается вышеуказанными сроками, и ПЦР единственный метод, с помощью которого возможно осуществлять мониторинг вирусемии (наличия вируса в крови).
  2. Вирусный гепатит В (ВГВ): в диагностике вирусного гепатита В ПЦР имеет свои неоценимые достоинства:

   1)      Качественное обнаружение ДНК ВГВ:

  • Ранняя диагностика острого гепатита В – ДНК вируса гепатита В начинает обнаруживаться в крови больного гепатитом В в среднем на 20 дней раньше, чем HBsAg («Австралийский» антиген).
  • Выявление мутантных штаммов вируса гепатита В.
  • Выявление скрытых форм вирусного гепатита В.

    2)    Количественная оценка уровня ДНК HBV:

  • Диагностика хронического гепатита В (вирусная нагрузка более 100000 является признаком хронического гепатита В).
  • Мониторинг активности вирусной репликации у носителей HBsAg.
  • Контроль эффективности противовирусной терапии.

   3)      Определение YMDD мутации (устойчивости вируса гепатита В к ламивудину) - в многочисленных исследованиях установлено, что у ряда пациентов, находящихся на монотерапии зефиксом (ламивудином), возможно появление мутантного штамма вируса, устойчивого к препарату, поэтому актуальной задачей является раннее выявление таких штаммов для коррекции схемы лечения.

      3.    Вирусный гепатит С (ВГС). Гепатит С редко протекает с ярко выраженными клиническими симптомами, чаще всего это случайные находки во время лабораторного обследования (обнаружение anti-HCV IgG). Учитывая всю серьезность этого заболевания (частую хронизацию процесса (85%) и возможность развития цирроза печени), становится понятным, насколько важна лабораторная диагностика в решении этого вопроса. И именно ПЦР играет ведущую роль в диагностике гепатита С позволяя:

1)      Установить факт инфицированности гепатитом С. Во-первых, это важно при обследовании контактных лиц, т.к. РНК ВГС появляется в крови больного гепатитом С гораздо раньше чем антитела, которые появляются как минимум через 2-3 месяца с момента инфицирования (период серологического окна). Во-вторых, определение anti-HCV IgG методом ИФА в некоторых случаях (часто у беременных) дает «ложноположительные» результаты, поэтому обнаружении антител к вирусу гепатита С, рекомендуется подтверждать качественным обнаружением РНК, и в зависимости от результатов ПЦР определяется тактика ведения пациента.

2)      Установить наличие показаний к противовирусному лечению, а также выбрать оптимальную схему лечения. Решить эти вопросы помогают количественное определение уровня РНК ВГС (при низкой вирусной нагрузке эффективность лечения выше) и определение генотипа ВГС (генотип 1 хуже отвечает на противовирусную терапию по сравнению с генотипами 2 и 3).

3)      Своевременно оценить эффективность проводимого лечения. Так, наиболее эффективными препаратами для лечения хронического гепатита С на сегодняшний день остаются препараты интерферона в комбинации с рибавирином. Курс лечения гепатита С (генотип 1) составляет 48 недель, но уже на 12 неделе лечения врач может оценить эффективность проводимой терапии, сопоставляя результаты анализов до начала лечения и на 12 неделе лечения.

4)      Оценить устойчивость ответа на лечение. Для этого проводят обнаружение РНК ВГС после окончания лечения, через 24 недели и через 72 недели после окончания лечения.

В заключение необходимо отметить, что сегодня ПЦР является самым чувствительным и специфичным методом прямого обнаружения возбудителей, позволяющим не только устанавливать этиологию заболевания, но и осуществлять контроль за течением инфекционного процесса и оценивать эффективность проводимой терапии.

        На платной основе стоимость проведения ПЦР:

Обнаружение вируса гепатита B (HBV) качественно – 200,0 руб.,

Обнаружение вируса гепатита B (HBV) количественно – 2000,0 руб.,

Обнаружение вируса гепатита C (HCV) качественно – 250,0 руб.,

Обнаружение вируса гепатита C (HCV) количественно – 2100,0 руб.

 

По всем вопросам проведения ПЦР обращаться:

РБ, г.Уфа, ул. Запотоцкого, 37, ГБУЗ РБ ИКБ №4 г.Уфа

телефон: (347) 250 -54-95, клинико-диагностическое отделение.